زمینه و هدف: پروبیوتیک ها میکروارگانیسم هایی سودمند برای سلامتی جوامع هستند. ساکارومیسس سرویزیه یکی از گونه های استفاده شده در بهبود کارکرد و درمان بیماری های دستگاه گوارش و مهار پاتوژن های روده ای است. پاتوتایپ های انتروهموراژیک اشریشیاکلی (EHEC) و انتروتوکسوژنیک (ETEC) دو بیماری زای روده ای شایع در جهان هستند که سبب اسهال می شوند. هدف این مطالعه، بررسی اثر ضد میکروبی عصاره مایع رویی کشت و لیز سلولی مخمر پروبیوتیک ساکارومیسس سرویزیه علیه اشرشیاکلی ETEC و EHEC است. مواد و روش کار: برای تهیه عصاره مایع رویی کشت، ابتدا سوسپانسیون مخمری سانتریفیوژ و مایع رویی کشت جدا و فیلتر شد. عصاره گیری با اتیل استات برای سه ساعت انجام شد. برای تهیه لیزات، رسوب به دست آمده از مرحله قبل را شستشو داده تا رسوب سانتریفیوژ تبدیل به لیز سلولی شده و با استفاده از فیلتر استریل شود. مایع رویی پس از جداسازی، به رسوب آب مقطر استریل اضافه شد و لیز سلولی با استفاده از سونیکاتور انجام گرفت. مایع به دست آمده از سانتریفیوژ و مایع رویی آن فیلتر شد. سپس مقدار MIC و MBC آن به روش میکرو دایلیوشن، طبق دستورالعمل CLSI تعیین شد. دامنه غلظت بررسی شده μ g/ml8192-16 بود. یافته ها: MIC و MBC عصاره مایع رویی کشت در هر دو پاتوتایپ ETEC و EHEC به ترتیب برابر با μ g/ml 4096 و μ g/ml 8192 به دست آمد. لیزات در هیچ یک از غلظت های به کاررفته، اثر مهارکنندگی بر دو باکتری نشان نداد. نتیجه گیری: مایع رویی کشت بر رشد سویه های ETEC و EHEC اثر مهارکنندگی داشت، اما لیزات سلولی فاقد چنین تاثیری بود. به عبارتی مواد ضدمیکروبی می تواند فقط در ترشحات سلولی وجود داشته باشد و احتمالا لیزات سلولی به دلیل غنی بودن از مواد مغذی لازم برای رشد باکتری و نداشتن ترکیبات ضدمیکروبی چنین تاثیر مهاری را نشان نمی دهد.

زمینه مطالعه: تلاش  ها در زمینه تهیه واکسن  های کارآمد برای مقابله با ایکولای انتروتوکسیژنیک (ETEC) به سمت شناسایی پادگن  های حراست شده ژنومی معطوف شده است. پادگن 43 یکی از اعضای خانواده بزرگ پروتئین های ترشحی باکتری ایکولای و سایر باکتری های گرم منفی با نام اتوترانزپورترها (ATs) است. پروتئین های اتوترانزپورتر ساختمان حراست شده مشابهی دارند و تعدادی از آن ها به دنبال عفونت های طبیعی و تجربی ETEC شناسایی شده اند. پادگن 43 با داشتن خصوصیات حدت زای تجمع سلولی و تشکیل بیوفیلم و حضور در سرم انسان های مبتلا به اسهال ناشی از ETEC، هدف ارزشمندی در تهیه واکسن محسوب می  شود. هدف: در این مطالعه با بهره گیری از روش های تجربی و ایمونوانفورماتیک به بررسی دقیق ساختار آنتی ژنی و ارزیابی ایمنی زایی پروتئین پادگن 43 سویه 510 ایکولای ETEC جدا شده از گوساله ها پرداختیم. روش کار: توالی اسیدآمینه ای، خصوصیات فیزیکی-شیمیایی، پایداری، ساختار دوم و سوم پروتئین و توانایی بالقوه در ایجاد پاسخ های ایمنی سلول های B و T با دارا بودن اپی توپ های مؤثر و خصوصیات آلرژی زا بودن آن از جمله شاخص های مورد توجه در این پژوهش هستند. نتایج: در این مطالعه 15 قطعه پپتیدی محرک پاسخ یاخته های B و T شناسایی شده است که تعداد 9 عدد از آن ها به عنوان پادگن معرفی گردیدند. نتیجهگیری نهایی: نتایج حاصل از مطالعات مجازی (in-silico) انجام شده روی این پروتئین حاکی از مناسب بودن آن برای تهیه واکسن های کلی باسیلوز گاو است.

زمینه و هدف: اشریشیاکلی انتروتوکسیژنیک (ETEC) شایع ترین عامل اسهال باکتریایی در سراسر دنیا است. باکتری ETEC در سطح سلول های اپی تلیالی روده کوچک کلنیزه شده و بعد انتروتوکسین مقاوم به حرارت (ST) و یا حساس به حرارت (LT) را ترشح می کند که با ورود به سلول ها باعث خروج آب و الکترولیت از سلول های اپی تلیالی روده شده و نهایتا موجب اسهال می گردد. این مطالعه به منظور تشخیص توکسین LT باکتری اشریشیاکلی انتروتوکسیژنیک با استفاده از تکنیک PCR-ELISA انجام شد.روش بررسی: در این مطالعه توصیفی با استفاده از آغازگرهای اختصاصی و با کمک روش PCR-ELISA تشخیص توکسین LT باکتری ETEC انجام شد. در این روش محصولات نشاندار شده توسط دیگوکسیژنین، به کف ظرف های دارای استرپتواویدین منتقل و به کمک آنتی بادی ضد دیگوکسی ژنین کونژوگه شناسایی شدند. همچنین از کاوشگر داخلی نشاندار با بیوتین برای تایید محصولات PCR استفاده گردید.یافته ها: توکسین LT با کمک روش PCR-ELISA شناسایی شد و میزان حساسیت آن 1.9 نانوگرم بود. همچنین این روش هیچگونه واکنش متقاطع با باکتری هایی از این خانواده نداشت.نتیجه گیری: روش 100 PCR-ELISA برابر حساس تر از روش PCR معمولی بوده و به دلیل عدم نیاز به ژل آگارز و دستگاه الکتروفورز می تواند جایگزین مناسبی برای روش های قدیمی باشد.

مقدمه: اشریشیاکلی انتروتوکسیژنیک عامل اسهال های باکتریایی که منجر به مرگ و میر سالانه صدها هزار کودک می شود. اشیرشیا کلی O157: H7، شایعترین سوش اشریشیاکلی انتروهموراژیک است. تولید یک واکسن ترکیبی موثر برای اشریشیاکلی انتروهموراژیک و اشریشیاکلی انتروتوکسیژنیک بسیار حایز اهمیت است. مواد و روش ها: در این مطالعه تکثیر و همسانه سازی ژن sicl، بعنوان یک DNA واکسن صورت گرفت. ترادف ژنهای کد کننده آنتی ژن از بانک ژنی ارزیابی و اپی توپهای آنها به منظور طراحی پرایمر برای ژن کایمری سنتتیک (تهیه شده از گروه امانی) بررسی شد و تکثیر آن از طریق PCR صورت گرفت، زیر همسانه سازی ژن کایمریک چند قسمتی در وکتور بیانی یوکاریوتیک به منظور ساخت DNA واکسن انجام شد و در آخر پروتیین با روش کروماتوگرافی نیکل تخلیص و با وسترن بلات ارزیابی شد. نتایج: نتایج ایمونوبلات بیان پروتیین کایمریک SICL به شکل ذرات نامحلول 12 ساعت پس از القا نمایانگر وجود یک باند 76 کیلو دالتونی است. تخلیص پروتیین نوترکیب با استفاده از ترادف هیستیدینی داخل ژن وتایید پروتیین تخلیص شده با آنتی بادی اختصاصی پروتیین نوترکیب، صحت بیان پروتیین را نشان داد. بحث و نتیجه گیری: مطالعات بیان و تخلیص پروتیین و ارزیابی آن با وسترن بلات، نشان دهنده بیان پروتیین در میزبان است.

لطفا برای مشاهده چکیده به متن کامل (PDF) مراجعه فرمایید.

اهداف: %30-70 موارد اسهال ناشی از عفونت های باکتریایی است. شایع ترین باکتری به دست آمده، اشریشیا کلی انتروتوکسیژنیک یا ETEC است. امکان به وجود آمدن ایمنی حفاظتی علیه این بیماری وجود دارد و طراحی واکسن آن از اهداف سازمان جهانی بهداشت است. بیشتر سویه های این باکتری، مولد توکسین حساس به حرارت هستند. لذا زیرواحد B توکسین حساس به حرارت، برای تولید واکسن مطرح است. هدف مطالعه حاضر، بهینه سازی بیان ژن زیرواحد B توکسین حساس به حرارت به منظور بررسی ایمنی زایی بود.مواد و روش ها: بهینه سازی بیان ژن زیرواحد B توکسین حساس به حرارت در مورد متغیرهای زمان، دما و غلظتIPTG  انجام شد. پس از بیان، پروتئین مورد نظر از طریق ستون تمایلی نیکل تخلیص شد. برای تولید آنتی بادی، پروتئین زیرواحد B توکسین حساس به حرارت به صورت زیر جلدی در چهار نوبت به همراه ادجوان به موش ها تزریق شد. در فواصل تزریقات و پس از آخرین تزریق، از موش ها خونگیری به عمل آمد و واکنش الایزا انجام شد.یافته ها: پس از بهینه سازی بیان، بهترین بیان پروتئین در زمان 3 ساعت، دمای 37 درجه سانتیگراد و غلظت 1 میلی مولار IPTG صورت گرفت. با استفاده از ستون نیکل، پروتئین با خلوص بیش از %95 تخلیص شد. واکنش الایزا نیز نشان دهنده تولید بالای آنتی بادی علیه این پروتئین در موش ها بود.نتیجه گیری: پروتئین زیرواحد B توکسین حساس به حرارت می تواند به عنوان مولکول ایمونوژن، یکی از اجزای مهم در تولید واکسن علیه ETEC باشد.

زمینه و هدف: حضور پاتوژن های میکروبی، شناسایی و حذف آنها در آب و فاضلاب از مهمترین معضلات بهداشتی محسوب می شود. هدف از این مطالعه شناسایی دو پاتوتایپ مهم اشریشیاکلی یعنی انتروتوکسیژنیک (ETEC) و انتروپاتوژنیک (EPEC) در تصفیه خانه فاضلاب شهری، بیمارستانی، لبنی و کشتارگاه در شهر کرمانشاه می باشد. روش کار: این مطالعه از نوع توصیفی مقطعی است. در این مطالعه از 6 تصفیه خانه فاضلاب تحت شرایط استاندارد و استریل 64 نمونه فاضلاب گرفته شد و به آزمایشگاه میکروب شناسی منتقل شد. در آنجا سویه های اشریشیاکلی جداسازی شده و پاتوتایپ های ETEC و EPECتوسط روشPCR شناسایی شدند. . یافته ها: بر اساس نتایج کشت افتراقی از 64 نمونه فاضلاب برداشت شده 62/90 درصد از نمونه ها دارای سویه اشریشیاکلی بودند. سویه ETEC به ترتیب در 25، 85/42، 3/33، 0، 6/28 و 0 درصد از نمونه‫ های فاضلاب ورودی تصفیه خانه های فاضلاب شهری، بیمارستان های امام رضا و فارابی، کارخانه لبنیات، بیمارستان محمدکرمانشاهی و کشتارگاه صنعتی همچنین به ترتیب در 20، 20، 0، 0، 6/16 و 0 درصد از نمونه های پساب خروجی این تصفیه‫ خانه‫ ها شناسایی گردید. نتیجه گیری: نتایج نشان از حضور اشریشیاکلی اسهال زای انتروتوکسیژنیک در پساب تصفیه خانه های فاضلاب شهری و بیمارستانی و همچنین اشریشیاکلی انتروپاتوژنیک در فاضلاب کشتارگاه دام است. با توجه به حضور سویه انتروتوکسیژنیک در فاضلاب ها اهمیت حذف کلیفرم‫ ها و کلیفرم‫ های گرماپای در تصفیه‫ خانه‫ های فاضلاب پر رنگ تر می‫ گردد. بنابراین می‫ بایستی نسبت به بهبود کارایی این سیستم‫ ها اقدامات جدی به عمل آورد.

اهداف: باکتری اشریشیاکلی انتروتوکسیژنیک (ETEC) یکی از شایع ترین عوامل بیماری اسهال است که هر ساله سبب مرگ تعداد زیادی در جهان می شود. طراحی و ساخت واکسن علیه این بیماری از اهداف سازمان های بهداشتی نظیر سازمان بهداشت جهانی است. از مهم ترین عوامل ویرولانس باکتری، توکسین حساس به حرارت (LT) است که به عنوان کاندیدای واکسن نیز مطرح است. هدف این مطالعه، بیان ژن زیرواحد B توکسین حساس به حرارت (LTB) به منظور بررسی ایمنی زایی بود.مواد و روش ها: اطلاعات مربوط به ژن LTB از بانک ژن استخراج و طراحی پرایمر صورت گرفت. با استفاده از واکنش PCR، ژن موردنظر از ژنوم باکتری تکثیر شده و با آنزیم های محدودالاثر در وکتور pBluescriptII SK و سپـس در وکتور بیـانیpET28a ، همسـانه سازی شد. تحت القایIPTG ، بیان ژن LTB بهینه سازی شد و پروتئین موردنظر توسط الکتروفورز مورد ارزیابی قرار گرفت.یافته ها: پروتئین نوترکیب با وزن مولکولی 15.5 کیلودالتونی در مقایسه با کنترل دارای بیان قابل ملاحظه ای بود. پروتئین موردنظر با استفاده از آنتی بادی ضدزیرواحد B کلراتوکسین با روش ایمونوبلاتینگ مورد تایید قرار گرفت.نتیجه گیری: با توجه به ایمونوژن بودن پروتئینLTB ، می توان از آن در طراحی واکسن همچنین به عنوان ادجوان قوی سیستم ایمنی مخاطی استفاده نمود.

مقدمه اشریشیاکلی انتروتوکسیژنیک(ETEC) از مهم ترین عوامل اسهال حاد باکتریایی در سراسر جهان می باشد. با اتصال ETEC به مخاط روده و تولید انتروتوکسین های حساس به حرارت(LT) و مقاوم به حرارت(ST) باعث بیماری در انسان به ویژه در کودکان می شود. این مطالعه به منظور تشخیص توکسین LT و ارزیابی مقاومت آنتی بیوتیکی باکتری ETEC انجام شد. مواد و روش ها در این مطالعه توصیفی-تحلیلی، 90 نمونه مدفوع اسهالی از کودکان زیر 5 سال جهت جداسازی اشریشیاکلی جمع آوری شد. در ابتدا سویه های اشریشیاکلی با استفاده از تست های بیوشیمیایی جداسازی و میزان شیوع سویه ETEC و حضور ژن LT با استفاده از تکنیک PCR بررسی و سپس مقاومت آنتی بیوتیکی این سویه ها با روش انتشار دیسک مورد مطالعه قرار گرفت. یافته های پژوهش: از 50 جدایه اشریشیاکلی، 4 سویه(8 درصد) حاوی ژن توکسین LT بودند. تمام سویه های ETEC حاوی ژن LT نسبت به آنتی بیوتیک های کوتریماکسازول، سفکسیم و جنتامایسین(4 سویه) مقاومت نشان دادند. هم چنین این سویه ها نسبت به سفتریاکسون (100 درصد)، ایمیپنم(100 درصد)، تریمتوپریم، سولفامتاکسازول، سیپروفلوکسازین، نالیدیکسیک اسید(75 درصد)، نیتروفورانتوئین، تتراسایکلین، آمیکاسین(50 درصد) و به دیسک های آمپی سیلین و سفالوتین(25 درصد) حساسیت نشان دادند. بحث و نتیجه گیری نتایج این پژوهش نشان داد که سویه ETEC در این منطقه از میزان شیوع گسترده ای برخوردار بوده اند. بنا بر این به کارگیری روش تشخیصی سریع و دقیق ملکولی PCR و تعیین الگوی مقاومت آنتی بیوتیکی می تواند بار عفونت های اسهالی را کم و به ارتقای سلامت کمک و از مرگ و میر کودکان جلوگیری نماید.

لطفا برای مشاهده چکیده به متن کامل (PDF) مراجعه فرمایید.